實驗室(shì)離心(xīn)機離(lí)心方法介(jiè)紹

更新(xīn)時間(jiān)：2024-03-08

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實(shí)驗室(shì)離(lí)心機分離(lí)方法不(bù)一(yī)，適用場合(hé)也(yě)不(bù)盡(jìn)相同(tóng)。目前(qián)最(zuì)主流(liú)的(dí)離心分離方法主要(yào)是差(chà)速離心法和(hé)區帶(dài)離(lí)心(xīn)法(fǎ)，其實(shí)在實驗室離(lí)心(xīn)技術製備超離(lí)心法(fǎ)一(yī)文中(zhōng)有(yǒu)提(tí)及(jí)兩(liǎng)種離(lí)心(xīn)方法(fǎ)，今天筆者對這兩(liǎng)種方(fāng)法(fǎ)的原理(lǐ)及(jí)應(yīng)用(yòng)介紹(shào)進(jìn)行補(bǔ)充和(hé)*。

　　1. 差速(sù)離心法(fǎ)：許(xǔ)多(duō)具有生物活(huó)性的生物大(dà)分子(zǐ)和(hé)亞(yà)細(xì)胞(bāo)器(qì)是不穩定(dìng)的，需要低溫高速(sù)離心，常用(yòng)的(dí)是差速(sù)離(lí)心法。通(tōng)過(guò)離心(xīn)後倒出(chū)上(shàng)清液和沉澱分開(kāi)，把(bǎ)分(fēn)離出來的上清液再增大轉速(sù)離(lí)心，分離出(chū)第二(èr)部分沉澱，這樣(yàng)不斷增(zēng)大轉速，逐級分離(lí)出所需要(yào)的物質。利用這種方(fāng)法(fǎ)可以(yǐ)有(yǒu)效(xiào)地(dì)分(fēn)離大小(xiǎo)上差別較大的(dí)顆粒，但(dàn)不能分離大(dà)小(xiǎo)相似的顆(kē)粒，而且所分(fēn)離出來(lái)的組分往往(wǎng)是不均(jūn)一的，雜(zá)有其他(tā)種(zhǒng)類(lèi)的(dí)顆粒(lì)。

　　2.區帶離(lí)心(xīn)法：其(qí)中又可以(yǐ)分為兩(liǎng)種(zhǒng)：速率區帶離(lí)心(xīn)和(hé)等(děng)密(mì)度速(sù)率區帶離心。

　　1) 速率區帶離心(xīn)法(fǎ)：這(zhè)是將(jiāng)小量(liáng)懸液放(fàng)在(zài)一(yī)平緩(huǎn)的(dí)密(mì)度梯度液上，用此(cǐ)梯度液來(lái)穩定顆粒(lì)的(dí)沉降(jiàng)。由於(yú)離心，顆粒離開(kāi)起始區帶而(ér)移動，移(yí)動的(dí)速度是由(yóu)顆(kē)粒的(dí)大(dà)小，形狀和(hé)它們所(suǒ)受實驗室(shì)離(lí)心機的離心(xīn)力來決(jué)定的(dí)。離心一段時間歷，各(gè)種穎(yǐng)粒(lì)將(jiāng)按照它們(mén)的相(xiāng)對(duì)速度移(yí)動而各個分開，成(chéng)為一係(xì)列區帶(dài)。用這(zhè)種方(fāng)法我(wǒ)們可(kě)以將沉(chén)降(jiàng)速度差為(wéi)20%或(huò)者更大的(dí)顆(kē)粒。

　　2)等(děng)密度(dù)區(qū)帶離心法：這(zhè)是將要(yào)分離的顆粒(lì)懸液放(fàng)至密(mì)度梯度液(yè)上(shàng)，或者實(shí)際上將顆(kē)粒溶於製作梯度的(dí)溶液(yè)中。通(tōng)過離心(xīn)，顆粒或(huò)者(zhě)上浮(fú)或(huò)者下沉，達(dá)到(dào)與(yǔ)它們(mén)自己(jǐ)密度(dù)相(xiāng)同的液(yè)體處在(zài)這(zhè)裏(lǐ)它(tā)們(mén)沒有重(zhòng)量，不(bù)管離心多(duō)長時間，它們(mén)再也(yě)不移動(dòng)了。這些(xiē)顆(kē)粒(lì)可成(chéng)為一(yī)係列區(qū)帶，每(měi)種(zhǒng)顆(kē)粒(lì)在它自(zì)己的密(mì)度(dù)區。所以，這是(shì)一種利(lì)用(yòng)顆粒浮密度(dù)的大小分(fēn)離(lí)顆(kē)粒(lì)大小的方法(fǎ)。使用(yòng)的(dí)介(jiè)質通常(cháng)是(shì)氯(lǜ)化(huà)銫(Cscl)和硫(liú)酸銫(sè)(Cs2SO4)。前者(zhě)適(shì)合於(yú)DNA分離，後者(zhě)適合於(yú)RNA分離(lí)。這種方法(fǎ)與(yǔ)速率區(qū)帶(dài)離心法(fǎ)相(xiāng)比，它有(yǒu)一個主要的缺(quē)點是在離心期間，顆(kē)粒不可避免地暴露在高(gāo)濃度的梯度(dù)溶(róng)液中，會引(yǐn)起(qǐ)顆粒的部分(fēn)損傷，並可能出(chū)現相當(dāng)於(yú)損傷顆粒(lì)的(dí)一些(xiē)額外的(dí)區(qū)帶。

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